Fenüülgalaktosiid CAS: 2818-58-8

Mõju ensüümi aktiivsusele: Fenüülgalaktosiidi kasutatakse tavaliselt β-galaktosidaasi ensüümi aktiivsuse mõõtmiseks. Kui β-galaktosidaas hüdrolüüsib fenüülgalaktosiidi, vabaneb see p-nitrofenoolist. P-nitrofenooli akumuleerumist saab kvantitatiivselt mõõta, mis annab ülevaate β-galaktosidaasi aktiivsusest. Seda efekti rakendatakse sellistes rakendustes nagu ensüümianalüüsid ja sõelumissüsteemid.

Geeniekspressiooni analüüs: Fenüülgalaktosiidi kasutatakse molekulaarbioloogia katsetes sageli substraadina geeniekspressiooni uurimiseks. β-galaktosidaasi kodeeriv lacZ geen on tavaliselt ühendatud teiste huvipakkuvate geenide regulatoorsete järjestustega. LacZ geeni ekspressioon ja fenüülgalaktosiidi hüdrolüüs β-galaktosidaasi poolt võivad näidata uuritava sihtgeeni ekspressioonimustrit ja taset.

Sõelumissüsteemid: Fenüülgalaktosiid on β-galaktosidaasi aktiivsust kasutavate sõelumissüsteemide oluline komponent. Üks laialdaselt tuntud näide on sinakasvalge sõelumismeetod, mida kasutatakse rekombinantsete või transformeeritud rakkude tuvastamiseks molekulaarbioloogia katsetes. Kolooniad, mis on edukalt omastanud rekombinantse DNA või läbinud geneetilise rekombinatsiooni, ekspresseerivad β-galaktosidaasi, mis viib fenüülgalaktosiidi hüdrolüüsini ja sinise värvuse moodustumiseni.

Valgu puhastamine: Mõnel juhul saab fenüülgalaktosiidi kasutada ligandina afiinsuskromatograafias, et puhastada valke, mis seonduvad spetsiifiliselt β-galaktosidaasiga või mida see aktiveerib. Huvipakkuva valgul võib olla afiinsusmärgis või fusioonmärgis, mis sisaldab β-galaktosidaasi siduvat domeeni. Valgusegu läbimisel immobiliseeritud fenüülgalaktosiidiga kolonni saab soovitud valgu selektiivselt kinni pidada ja seejärel elueerida.