Meie ümber on palju laulmata kangelasi, kes näivad olevat tavalised, kuid tegelikult annavad nad meile vaikselt palju kaasa.Proteinaas K on molekulaardiagnostika tööstuse "laulmata kangelane", kuigi võrreldes selle tööstuse "suure ja võimsaga", on proteinaas K nii tagasihoidlik, et oleme selle tähtsust juba ammu tähelepanuta jätnud.Uue krooniepideemia puhkemisega on nõudlus proteinaas K järele hüppeliselt kasvanud ning pakkumine kodu- ja välismaal jääb tarbimisest kaugele maha ning kõik said äkki aru, et proteinaas K on nii oluline.
Milleks on proteinaas K kasutamine?
Proteinaas K on proteolüütilise ensüümi aktiivsusega seriinproteaas ja suudab säilitada aktiivsust väga erinevates keskkondades (pH (4-12,5), kõrge soolasisaldusega puhver, kõrge temperatuur 70°C jne).Lisaks ei inhibeeri proteinaas K aktiivsust SDS, uurea, EDTA, guanidiinvesinikkloriid, guanidiini isotiotsüanaat jne, samuti võib teatud kogus pesuainet suurendada proteinaas K aktiivsust. Meditsiinilises ravis (viiruste ja mikroobide desinfitseerimine ), toit (liha pehmendamine), nahk (juuste pehmendamine), veini valmistamine (alkoholiselgitamine), aminohapete valmistamine (lagunenud suled), nukleiinhapete ekstraheerimine, in situ hübridisatsioon jne, proteinaas K Rakendusi on.Kõige sagedamini kasutatav rakendus on nukleiinhappe ekstraheerimine.
Proteinaas K võib ensümolüüsida proovis igasuguseid valke, sealhulgas neid histoone, mis on tihedalt seotud nukleiinhapetega, nii et nukleiinhapped saaksid proovist vabaneda ja ekstrakti vabaneda, hõlbustades ekstraheerimise ja puhastamise järgmist etappi.Viiruse nukleiinhappe tuvastamisel on proteinaas K üks olulisi komponente viiruse proovivõtulahuses.Proteinaas K võib purustada ja inaktiveerida viiruse kattevalku, mis on transportimise ja tuvastamise etapis ohutum;Lisaks sellele võib proteinaas K lagundada ka RNaas, mis takistab viiruse RNA lagunemist ja hõlbustab nukleiinhapete tuvastamist.
Proteinaas K üleöö kuulsus
Kas teadusliku uurimistöö või IVD valdkonnas on nukleiinhapete ekstraheerimine kõige elementaarsem eksperiment, seega on proteinaas K alati olnud väga oluline.Kuid varem oli proteinaas K palju vähem tuntud kui selle roll.Suur osa sellest tulenes sellest, et proteinaas K pakkumise ja nõudluse suhe oli väga stabiilne.Vähesed inimesed arvavad, et proteinaas K tarnimine oleks probleem.
Uue krooniepideemia puhkemisega on nõudlus nukleiinhapete testimise järele kasvanud.2020. aasta juuni lõpu seisuga on Hiina lõpetanud ligi 90 miljonit uut kroonikatset ja see arv on maailma mastaabis veelgi murettekitavam.Nukleiinhapete ekstraheerimise katsetes on proteinaas K töökontsentratsioon umbes 50-200 μg/mL.Üldiselt kulub nukleiinhappe proovi ekstraheerimiseks umbes 100 μg proteinaasi K.Tegelikul kasutamisel kasutatakse nukleiinhapete ekstraheerimise efektiivsuse suurendamiseks sageli proteinaas K-d suuremas koguses.Uue koroonaviiruse nukleiinhapete tuvastamine on toonud kaasa suure hulga proteinaas K nõudluse.Proteinaas K algne pakkumise ja nõudluse tasakaal purunes kiiresti ja proteinaas K-st sai üleöö oluline epideemia ennetusmaterjal.
Raskused proteinaas K tootmisel
Kuigi epideemia arenedes on inimesed hakanud väärtustama proteinaas K olulist väärtust, on piinlik, et proteinaas K liigse madalseisu tõttu on proteinaas K tootmisega tegelenud vähesed kodumaised ettevõtted. soovivad luua proteinaas K tootmist Tootmisprotsessi käigus avastati, et proteinaas K on äärmiselt eriline valk.Proteinaas K tootmisvõimsuse laiendamine lühikese aja jooksul on äärmiselt keeruline.
Proteinaas K suuremahuline tootmine seisab silmitsi järgmiste raskustega
1. Madal väljendus
Proteinaas K võib mittespetsiifiliselt lagundada enamikku valke ja põhjustada ekspressiooni peremeesrakule tõsist toksilisust.Seetõttu on proteinaas K ekspressioonitase üldiselt väga madal.Proteinaas K kõrgelt ekspresseerivate ekspressioonisüsteemide ja tüvede sõelumine nõuab üldiselt pikemat tsüklit.
2. Pigmentide ja nukleiinhapete jäägid
Suuremahuline fermentatsioon toob sisse suure hulga pigmendi ja peremeesnukleiinhappejääke.Neid lisandeid on lihtne eemaldada lihtsa puhastusprotsessiga ning kompleksne puhastamine suurendab kulusid ja vähendab taaskasutamise määra.
3. Ebastabiilsus
Proteinaas K ei ole piisavalt stabiilne, võib end ensümolüüsida ning seda on raske stabiilselt 37°C juures pikka aega ilma kaitsva aineta säilitada.
4. Lihtne sadestada
Proteinaas K külmkuivatatud pulbri valmistamisel, et tagada proteinaas K tahkete ainete sisaldus külmkuivatatud pulbris, on vaja lisada kõrge kontsentratsiooniga külmkuivatatud kaitseainet, kuid kui proteinaas K kontsentratsioon jõuab 20mg/mL ja üle selle, see on lihtne. Agregatsioon moodustab sademe, mis raskendab kõrge kuivainesisaldusega proteinaas K külmkuivatamist.
5. Suur investeering
Proteinaas K on tugeva proteaasi aktiivsusega ja suudab laboris teisi proteaase hüdrolüüsida.Seetõttu vajab proteinaas K uurimis- ja arendustegevuse ning tootmise jaoks spetsiaalseid tootmispiirkondi, seadmeid ja personali.
XD BIOCHEMi proteinaas K lahus
XD BIOCHEMil on küps valkude ekspressiooni- ja puhastamisplatvorm ning rikkalik kogemus rekombinantsete valkude ekspressioonis ja puhastamises ning tootmisprotsesside optimeerimises.Tänu uurimis- ja arendusmeeskonna kiirele moodustamisele on proteinaas K suuremahulisest tootmisprotsessist üle saadud.Igakuine külmkuivatatud pulbri toodang on üle 30 kg.Tootel on stabiilne jõudlus, kõrge ensüümspetsiifiline aktiivsus ning see ei sisalda peremeesorganismi tsütokroomi ja nukleiinhappejääke.Tere tulemast võtma ühendust XD BIOCHEMiga. Hankige proovipakett (e-post:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEMi tehniliste lahenduste hulka kuuluvad
Kasutades mitme koopiaga plasmiidide integreerimist, valitakse välja kõrge ekspressiooniga tüved ekspressioonitasemega 8g/l, mis lahendab proteinaas K madala ekspressioonitaseme probleemi.
Mitmeastmelise puhastusprotsessi loomisega eemaldati proteinaas K peremeestsütokroom ja nukleiinhappejäägid edukalt alla standardväärtuse.
Kaitsepuhverpreparaatide suure läbilaskevõimega sõelumise abil valiti puhver, mis suudab stabiilselt säilitada proteinaas K 37 °C juures.
Sõelumispuhvrid lahendavad probleemi, et proteinaas K-d on kerge agregeerida ja kõrgete kontsentratsioonide korral sadestada, ning see loob aluse proteinaas K kõrge tahke sisaldusega külmkuivatamisel.
XD BIOCHEM proteinaas K proov
XD BIOCHEM proteinaas K stabiilsustest: pärast 80 päeva möödumist toatemperatuuril aktiivsuses olulisi muutusi ei toimu
XD BIOCHEM proteinaas K stabiilsustest: pärast 80 päeva möödumist toatemperatuuril aktiivsuses olulisi muutusi ei toimu.
XD BIOCHEM proteinaas K ja konkureerivate toodete nukleiinhapete ekstraheerimise efekti võrdlus.Nukleiinhapete ekstraheerimise protsessis kasutatakse vastavalt XD BIOCHEM ja konkureerivat proteinaasi K.XD BIOCHEM proteinaasi K ekstraheerimise efektiivsus on kõrgem ja sihtgeeni Ct väärtus madalam.
Postitusaeg: 31. detsember 2021