4-nitrofenüül-beeta-D-galaktopüranosiid CAS: 200422-18-0

Toime: ONPG on substraat, mida kasutatakse spetsiaalselt β-galaktosidaasi ensüümi olemasolu ja aktiivsuse tuvastamiseks. Kui β-galaktosidaasi ensüüm on olemas ja aktiivne, lõhustab see ONPG kaheks produktiks: o-nitrofenooliks ja galaktoosi derivaadiks. o-nitrofenooli vabanemine põhjustab kollase värvuse muutuse, mida saab mõõta spektrofotomeetriga.

Rakendus: ONPG-l on mitu rakendust molekulaarbioloogia ja biokeemia uuringutes:

β-galaktosidaasi aktiivsuse määramine: ONPG-d kasutatakse tavaliselt β-galaktosidaasi ensüümi aktiivsuse mõõtmiseks ja kvantifitseerimiseks. o-nitrofenooli moodustumise kiirust, mis on otseselt proportsionaalne ensüümi aktiivsusega, saab mõõta spektrofotomeetriliselt.

Geeniekspressioon ja -regulatsioon: ONPG-d kasutatakse sageli geeniekspressiooni ja -regulatsiooni uuringutega seotud katsetes. Seda kasutatakse sageli fusioonvalkude testides, näiteks tavaliselt kasutatavas lacZ fusioonsüsteemis, et uurida geenide ekspressiooni spetsiifiliste promootorite kontrolli all. ONPG abil mõõdetud beeta-galaktosidaasi aktiivsus annab ülevaate geeniekspressiooni tasemest.

β-galaktosidaasi aktiivsuse skriining: ONPG-d saab kasutada kolorimeetrilise skriiningmeetodina rekombinantse DNA tehnoloogias, et tuvastada β-galaktosidaasi kodeeriva LacZ geeni olemasolu ja funktsionaalsust. See skriiningmeetod aitab tuvastada kloone, mis sisaldavad huvipakkuvat geeni.

Ensüümi kineetika uuringud: ONPG on kasulik ka β-galaktosidaasi ensüümi kineetika uurimisel. Mõõtes ensüümi-substraadi reaktsiooni kiirust erinevatel substraadi kontsentratsioonidel, on võimalik määrata kineetilisi parameetreid, nagu Michaelis-Menteni konstandid (Km) ja maksimaalsed reaktsioonikiirused (Vmax).