4-nitrofenüül-beeta-D-galaktopüranosiid CAS:200422-18-0

Toime: ONPG on substraat, mida kasutatakse spetsiaalselt ensüümi β-galaktosidaasi olemasolu ja aktiivsuse tuvastamiseks.Kui β-galaktosidaasi ensüüm on olemas ja aktiivne, lõhustab see ONPG kaheks tooteks: o-nitrofenooliks ja galaktoosi derivaadiks.O-nitrofenooli vabanemine toob kaasa kollase värvuse muutumise, mida saab mõõta spektrofotomeetriga.

Rakendus: ONPG-l on mitu rakendust molekulaarbioloogia ja biokeemia uuringutes:

β-galaktosidaasi aktiivsuse määramine: ONPG-d kasutatakse tavaliselt β-galaktosidaasi aktiivsuse mõõtmiseks ja kvantifitseerimiseks.O-nitrofenooli moodustumise kiirust, mis on otseselt võrdeline ensüümi aktiivsusega, saab mõõta spektrofotomeetriliselt.

Geeniekspressioon ja regulatsioon: ONPG-d kasutatakse sageli geeniekspressiooni ja regulatsiooni uuringutega seotud katsetes.Seda kasutatakse sageli fusioonvalgu testides, nagu tavaliselt kasutatav lacZ fusioonsüsteem, et uurida geenide ekspressiooni spetsiifiliste promootorite kontrolli all.ONPG abil mõõdetud beeta-galaktosidaasi aktiivsus annab ülevaate geeniekspressiooni tasemest.

β-galaktosidaasi aktiivsuse skriinimine: ONPG-d saab kasutada kolorimeetrilise sõelumismeetodina rekombinantse DNA tehnoloogias, et tuvastada β-galaktosidaasi kodeeriva LacZ geeni olemasolu ja funktsionaalsust.See sõelumismeetod aitab tuvastada kloone, mis sisaldavad huvipakkuvat geeni.

Ensüümi kineetika uuringud: ONPG on kasulik ka β-galaktosidaasi ensüümi kineetika uurimisel.Mõõtes ensüümi-substraadi reaktsiooni kiirust erinevatel substraadikontsentratsioonidel, on võimalik määrata kineetilisi parameetreid nagu Michaelis-Menteni konstandid (Km) ja maksimaalsed reaktsioonikiirused (Vmax).