Kuidas määrata optimaalne kontsentratsioon?
Indutseerija IPTG (isopropüül-beeta-d-tiogalaktosiid) puhul, mida suurem on kontsentratsioon, seda parem.Optimaalne kontsentratsioon sõltub konkreetsetest katsetingimustest ja soovitud induktsiooniefektist.
Üldiselt kasutatakse IPTG kontsentratsiooni vahemikus 0,1-1 mM.Madalamad kontsentratsioonid võivad vähendada kahjulikku mõju rakkude kasvule ja vähendada sihtvalkude üleekspressioonist tingitud tsütotoksilisust.Kõrgemad kontsentratsioonid võivad põhjustada rakkude liigset metaboolset koormust, mõjutades rakkude kasvu ja ekspressioonitõhusust.
Optimaalse kontsentratsiooni määramise viis võib olla sihtvalgu ekspressioonitaseme hindamine, viies läbi erinevatel kontsentratsioonidel IPTG induktsioonitestid.Väikesemahulisi kultiveerimiskatseid saab läbi viia, kasutades erinevaid IPTG kontsentratsioone (nt 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM jne) ja ekspressiooniefekti erinevatel kontsentratsioonidel saab hinnata sihtvalgu (nt Westerni valgu) ekspressioonitaseme tuvastamise teel. blot või fluorestsentsi tuvastamine).Vastavalt katsetulemustele valiti optimaalseks kontsentratsiooniks parima ekspressiooniefektiga kontsentratsioon.
Lisaks võite viidata ka vastavale kirjandusele või teiste laborite kogemustele, et mõista tavaliselt kasutatavat IPTG kontsentratsioonivahemikku sarnastes katsetingimustes ning seejärel optimeerida ja kohandada vastavalt katsevajadustele.
Oluline on märkida, et optimaalne kontsentratsioon võib varieeruda sõltuvalt erinevatest ekspressioonisüsteemidest, sihtvalkudest ja katsetingimustest, seega on kõige parem optimeerida iga juhtumi puhul eraldi.
Postitusaeg: 28. september 2023